研究背景:
oligonol是从荔枝果实中提取的一种低分子量多酚产品。实验研究了oligonol在二甲基亚硝胺(DMN)诱导雄性SD大鼠慢性肝损伤中的抗纤维化作用及其机制。口服oligonol(10和20mg/kg)可改善DMN诱导的大鼠肝脏组织学和血清指标的异常。oligonol可在mRNA水平上抑制DMN诱导的TNF-α、IL-1β、IL-6、环氧合酶-2和诱导型一氧化氮合酶的表达。用oligonol消除DMN处理的大鼠NF-κB激活和JNK磷酸化。oligonol降低了DMN处理后肝脏丙二醛和活性氧的增加，并恢复了蛋白SH、非蛋白SH水平和过氧化氢酶活性。使用oligonol可增强Nrf2转位到细胞核，增加PI3K和磷酸化Akt水平。oligonol处理的大鼠肝纤维化相关因子如α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子-β1和I型胶原水平降低。组织学和免疫组化分析显示，oligonol可恢复肝组织中胶原的积累和抑制肝星状细胞(HSCs)的激活。综上所述，oligonol通过JNK/NF-κB和PI3K/Akt/Nrf2信号通路对DMN中毒大鼠具有抗氧化、保肝和抗纤维化作用。这些结果表明，抗氧化剂oligonol是一种潜在的有效的保护剂，以防止慢性肝损伤
结果.1oligonol能改善DMN大鼠的肝损伤
AST,ALT(A、B),总胆红素和直接胆红素的浓度(C,D),和白蛋白水平显示肝功能异常(E)。用10和20mg/kg剂量的oligonol可以改善这些肝脏生物标志物。
结果2oligonol改善DMN肝组织病理学程度
通过肝切片观察oligonol对DMN诱导的肝组织病理学改变的影响。对照组肝脏显示正常的肝结构，中心静脉被典型的放射肝索包围(A)。DMN中毒大鼠肝脏组织结构扭曲，广泛凝固性坏死，小叶中心区肝细胞结构完整性丧失(B)。值得注意的是，使用寡聚醇可以改善这些肝毒性，使肝脏结构正常化(C,D)。HE染色切片的坏死面积定量分析证实了oligonol对DMN诱导的肝损伤的保护作用
结果3oligonol处理抑制DMN诱导的氧化应激
用DCFDA探针测定肝匀浆中总ROS，通过测定脂质过氧化产物MDA检测脂质过氧化水平。DMN大鼠体内ROS水平和MDA含量升高，但oligonol以剂量依赖的方式抑制ROS水平和MDA含量(A,B)。测定肝脏匀浆中总SH和非蛋白SH(C、D)的水平以及过氧化氢酶(一种细胞内抗氧化酶)活性(图4E)。对DMN中毒大鼠分别给予10和20mg/kg的oligonol可完全恢复被抑制的抗氧化因子，使其值接近对照组。
结果4oligonol对DMN诱导的肝脏炎症及NF-κB活化的影响
RT-PCR检测肝脏TNF-α、IL-1β、IL-6、COX-2、mRNA的表达，并通过标准化方法对内化基因GAPDH的表达进行定量。DMN诱导的这些促炎介质的表达水平在oligonol处理的大鼠肝脏中显著受到抑制。NF-κB的激活是基于Westernblot分析从细胞质转入细胞核的RelA(p65)。与TFIIB和β-actin相比，NF-κBp65在细胞核和细胞质中的表达水平均通过图像分析进行定量。大鼠肝脏中NF-κB增强，NF-κB细胞浆减少，oligonol处理显著逆转了这些DMN诱导的现象。这些结果表明，oligonol处理DMN中毒大鼠可通过抑制NF-κB,p65从胞浆转位到核内，从而有效抑制NF-κB活化。为探讨DMN中毒大鼠NF-κB活化的分子机制，采用Westernblot法检测c-Junn端激酶(JNK)水平。在DMN处理的大鼠中，JNK的磷酸化水平增加，而oligonol降低了JNK的磷酸化水。
结果5oligonol对DMN诱导的肝损伤中Nrf2激活和Akt磷酸化的影响，
检测核和细胞质中转录因子Nrf2的蛋白水平。Nrf2蛋白的Westernblotting结果显示，与对照组相比，DMN损伤大鼠细胞核中Nrf2含量与胞浆中Nrf2含量的比例显著降低，而oligonol处理后，这一比例显著升高(图7A)。为了证实oligonol对DMN中毒大鼠肝脏中Nrf2的激活作用，我们检测了Nrf2下游的HO-1基因的产物HO-1水平。寡聚醇处理诱导DMN中毒大鼠肝脏HO-1水平，与Nrf2激活一致(B)。通过Westernblot检测PI3K和磷酸化Akt蛋白水平，探讨oligonol激活Nrf2的分子机制。DMN处理的大鼠PI3K和磷酸化Akt蛋白水平降低。然而，oligonol处理DMN中毒大鼠显著且剂量依赖性地提高了磷酸化Akt和PI3K蛋白水平(C,D)。
结果6oligonol对DMN诱导的慢性肝损伤的抗纤维化作用
天狼星红染色检查胶原堆积(染色为红色)。对照组肝脏切片除门静脉区外几乎没有胶原纤维(A)，DMN组肝脏组织中胶原含量增加(B)。然而，oligonol组(Oli10和Oli20)胶原含量显著恢复到正常水平(C,D)，且呈剂量依赖性。天狼星红染色切片上所观察到的纤维化面积的定量分析支持oligonol抗DMN诱导的肝损伤纤维化的作用(图8I)。
讨论：
本研究结果表明，oligonol在预防DMN诱导的慢性肝损伤方面非常有效，这很可能是由其作为抗氧化剂抑制氧化应激和脂质过氧化的活性介导的。具有抗炎作用，可抑制JNK/NF-κB通路，诱导TNF-α、IL-1β、IL-6、COX-2、iNOS等促炎介质。Oligonol激活Nrf2，增加HO-1和PI3K的产生，并诱导Akt磷酸化，提示PI3K/Akt/Nrf2信号通路与改善大鼠肝脏氧化应激状态有关。oligonol对DMN诱导的大鼠肝纤维化具有抗纤维化作用。oligonol活动最有可能由于其抑制HSC的活化能力,减轻肝脏炎症通过抑制NF-κB激活的肝纤维化的早期阶段和恢复通过Nrf2激活氧化状态的平衡。因此，这些发现表明oligonol可能是一种潜在的治疗药物，以防止肝炎症及其发展为肝纤维化。
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